此法采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術(shù)。特異性抗體對(duì)于C7已經(jīng)被預(yù)先涂到微孔板。標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸入井和任何C7目前的固定抗體的約束。生物素共軛的抗體特異于C7除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后，加入到孔中。抗生物素蛋白共軛的辣根過氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經(jīng)過洗滌，以除去任何未結(jié)合的抗生物素蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，顯色成比例的量的初始步驟中的約束的C7。彩色顯影被停止并測量的顏色的強(qiáng)度。

1。準(zhǔn)備好所有試劑，工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。

2。請(qǐng)確定井?dāng)?shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表

。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí)，在37℃下一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測。

4。每孔中取出的液體，不洗。

5。向每孔中加入100μl生物素抗體（1倍）。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí)，在37℃下（生物素抗體（1X）可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）

6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對(duì)干凈的紙巾。

7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí)，在37℃下

8。重復(fù)的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。

9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光

10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板，以確保充分混合。

11。在5分鐘內(nèi)，設(shè)置至450nm，使用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會(huì)比較高，不太準(zhǔn)確。